نظام المناعة الطبيعي

تقرير 1: الإستكشافات الأولية لمشروب الزد ري في المختبر

أنواع الفحوصات: الحماية من موت الخلايا المُبرمج

حماية وظيفة الميتوكندريا

إختبار PMN للهجرة (العشوائية والموجهه)

تم أداءه: نوفمبر 2008

 

المحلل

Steve G. Carter

مراجعة

Gitte Jensen Ph.D.

 

تقرير 1: الإستكشافات الأولية لمشروب الزد ري في المختبر

الغرض:

كان الغرض من هذه الدراسة لتقييم حزمة من الآثار البيولوجية / المناعية التي يمكن أن تكون سببا في زراعة من خلايا المناعة البشرية، عندما تتعرض لمشروب الزد ري.

الخلفية:

لقد وضعت مشروبات الزد ري على أساس مبادئ الايورفيدا، ويتضمن عددا من المكونات المعروفة كمضادة للأكسدة والخصائص المضادة للالتهابات. ومع ذلك، لا يوجد بحث متاح حاليا لتوثيق بالضبط كيف يعمل هذا المزيج على مكونات محددة من الجهاز المناعي البشري.

مختبرات نظام المناعة الطبيعي NIS فحصت سابقا مشروب الزد ري في حماية مضادات الأكسدة CAP-e. حيث تبين ان المواد المضادة للاكسدة للزد ري الواردة قادرة على الدخول للخلايا وحمايتها من تلف الأكسدة. وهكذا، فإن مركبات الزد ري هي متاحة حيويا على المستوى الخلوي.

تبعيات بروتوكول البحث، مع البيانات المقررة هنا، تعهدت بخطوات مهمة في خلق قاعدة من المعرفة حول كيفية عمل المنتجات الخاصة، مع التركيز على وظيفة الميتوكوندريا، والسلامة الخلوية، وتأثيرات المضادة للالتهابات.

البيانات من هذا العمل تخدم بمثابة الأساس لمزيد من التخطيط القائم على الخلية والبحث الإكلينيكي، ونأمل من أهمية كافية لتبرير مزيد من الجهود من أجل النشر.

العمل المنجز:

خلال هذه الدراسة اختبرنا ما يلي:

0. الفحوصات الأساسية لبدء العمل على اختبار المنتجات الجديدة؛

1. تقييم حماية وظيفة الميتوكوندريا في حالة غياب أو على العكس وجود الإجهاد التأكسدي (CAP-m)؛

2. تقييم لحماية سلامة الخلوية (الحماية من خلايا الموت المبرمج) في حال غياب أو على العكس وجود الإجهاد التأكسدي (CAP-1)؛

3. تقييم التأثيرات المترتبة على مضاد الإلتهاب مقابل سلوك المراقبة المناعي للخلية متعددة الأشكال النووية PMN.

موجز الملاحظات:

وجدنا أن الزد ري:

• يعمل على زيادة وظيفة الميتوكوندريا في الخلايا متعددة الأشكال النووية PMN؛

• حافظت على بقاء الخلية تحت الإجهاد التأكسدي.

• زيادة الهجرة من الخلايا متعددة الأشكال النوويةPMN (تعتبر جزءا من مراقبة المناعة الطبيعية)؛

• زيادة الهجرة من الخلايا PMN نحو البكتيريا الببتيدية F-MLP (تعتبر نموذجا لأحد الجوانب الهامة لدينا للدفاع المضاد للبكتيريا وآليات الدفاع المناعي)؛

• خفض هجرة الخلايا PMN نحو LTB4 وسطاء للالتهابات.

تفاصيل المنهجية للتقرير 1:

0. الفحوصات الأساسية لبدء العمل على اختبار المنتجات الجديدة:

نستخدم فحص سلامة الخلية الليمفاوية لتقييم مدى الأمان للعمل على المنتجات الجديدة. وهذه نقطة مهمة في البداية وتقود للتعرف على مدى العمل الأمثل لمنتج معين في الفحوصات المعتمدة على الخلية.

لقد إكتشفنا بطريق الصدفة ذلك المنتج الذي يحمي بشكل حقيقي خلايا الجهاز المناعي لتبقى حية وصحيحة عند الزراعة، من خلال بركة التوزيع للخلايا الليمفاوية الصحية الععادية يكون عمر بعض الخلايا منها قصير. في لحظة سحب الدم جزء صغير من الخلايا الليمفاوية ربما كان في طريقه للموت، ولكن كان ما يلفت الإنتباه لنرى أن المنتج قادرا على أن يطيل حياة الخلية الصحية عند الزراعة.

تستخدم في هذا الفحص المبدئي للسلامة خلايا دم طازجة ونقية وطرفية وأحادية النواة من متطوع صحي، حيث تزرع الخلايا حتى الليلة التاليةفي غياب أو على العكس وجود تسلسل من المحاليل المخففة للمنتج المراد فحصه، وفي اليوم التالي تغسل الخلايا وتصبغ بصبغة ناتجة من إتحاد صبغتين، وتصبغ الخلايا عند مراحل مختلفة من موت الخلية. قياسات متعددة تتبع القياس الخلوي وعندئذ تسمح بتحليل النتيجة المرجوة من المنتج على السلامة الخلوية مقابل الموت.

1. تقييم حماية وظيفة الميتوكوندريا في حالة غياب أو على العكس وجود الإجهاد التأكسدي (CAP-m)؛

المتوكندريا هي أعضاء داخل الخلايا ومسؤولة عن إنتاج الطاقة الخلوية. إنخفاض وظيفة الميتوكوندريا تكون مصاحبة لحالات الإلتهابات مثل تقدم العمر و الأمراض الإنحلالية وهذا الفحص يقيس وظيفة الميتوكوندريا ويختبر إذا ما كان منتج الفحص يحتوي على مركبات قادرة على حماية وظيفة الميتوكوندريا بشكل صحي وأيضا حمايتها في الخلايا تحت الإجهاد التأكسدي.

لقد تم زراعة خلايا دم الإنسان النقية الطازجة الطرفية أحادية النواة PBMC وخلايا الدم متعددة الأشكال النووية PMN في غياب أو على العكس في وجودسلسلة من المحاليل المخففة لمنتج الفحص أو بدون معالجة إضافية أو وجود الإجهاد التأكسدي.

بعد مرور فترة الحضانة، وقد تم قياس مستوى وظيفة الميتوكوندريا من قبل صبغها مع علامة الأحمر MitoTracker ، الذي يصبح وميض فلوري نتيجة لذلك، وبما يتناسب مع وظيفة الميتوكوندريا. ولذلك، فإن كثافة وميض الناتجة تتناسب مع وظيفة الميتوكوندريا، ويتم تقييمها من قبل التدفق الخلوي. الإنخفاض الذي يحدث في كثافة الوميض ينعكس في تقليص وظيفة الميتوكوندريا، كما هو تلف الميتوكوندريا بواسطة الاكسدة. إذا كان وجود المنتج الفحص يحمي وظيفة الميتوكوندريا، عندها يمكن ملاحظة كثافة أعلى من الوميض.

تم إجراء الفحوصات حيث تم تنفيذ فحص كل حالة ، بما في ذلك تخفيف كل سلسلة من منتج الفحص، في ثلاث نسخ. وتكررت هذه التجربة ثلاث مرات باستخدام خلايا من مختلف الجهات المانحة.

Zrii Immune System

2. تقييم الحماية من موت الحماية المبرمج في حال غياب أو وجود الأكسدة

الضرر التأكسدي يمكن أن يؤدي إلى الوفاة المبكرة للخلايا (موت الخلية المبرمج). ويمكن رصد مسار موت الخلايا بواسطة العلامات المحددة للخلية إلى حد كبير. الحماية من موت الخلية المبرمج بالإمكان رصده كتأخير أو غياب هذه العلامات.

موت الخلايا المبرمج هو عملية منظمة بعناية لموت الخلابا الذي يحدث كجزء طبيعي من نمو الخلايا. على النقيض من النخير، شكل من الخلايا الميتة الناتجة من الإصابة الحادة للخلايا. وموت الخلايا المبرمج يتم في عملية أمر مفيد بشكل عام خلال دورة حياة الكائن الحي. مثال على الخلايا السليمة في الكائن الحي هو فقدان حزام بين الأصابع في الإنسان.

Zrii Immune System

 

تخثر الأوعية الدموية البشرية، annexin الخامس، هو CA2 + التي تعتمد على فسفوليبيد ملزم البروتينات التي لها قابلية عالية للفسفاتيديل. في الخلايا الإعتيادية في التطبيق، يقع فسفاتيديل على سطح السيتوبلازم من غشاء الخلية. ومع ذلك، في تكوين الخلايا الميتة، ال PS ينتقل من النشرة الداخلية إلى الخارجية لغشاء البلازما، ومن ثم تعرض PS للبيئة الخارجية الخلوية.

أعتبر ال Annexin الخامس مع fluorophore بإستطاعته تحديد الخلايا الميتة عن طريق الربط بين فسفاتيديل المعرضة على نشرة الخارجية.

نحن نستخدم Annexin- الخامس FITC لتسمية الخلايا الميتة. المشاركة في التبقيع مع PI أو7AAD، الخلايا المبقعة فقط في مرحلة متأخرة من موت الخلايا، يتيح لنا أن نميز في وقت مبكر أو في وقت متأخر موت الخلايا المبرمج. وعليه تكون الخلايا النخرية هي الخلايا المبقعة فقط مع PI أو 7AAD.

Zrii Protects Immune system

بين وحيدات النوى المتجددة (PBMC) المعزولة من الخلايا الدموية الخارجية للإنسان ومتعددة الأشكال النووية للخلايا، النسبة بالفعل متواجدة في مسار الخلايا الميتة المبرمجة. عندما تزرع في المختبر، هذه الخلايا مواصلة في عملية موت الخلايا المبرمج. موت الخلايا المبرمج المبكر هو عملية عكسية. زراعة خلايا بشرية من قبل تنقيته حديثا في ظل ظروف الزراعة الطبيعية (أي لا وجود للأكسدة) مع وبدون اختبار المنتج، ومن ثم تبقيع لخلايا الموت المبرمج، نحن نقارن بين قدرة على اختبار المنتج لانقاذ الخلايا بالفعل على المسار المؤدي إلى موت الخلايا المبرمج.

بشكل موازي، تم إضافة فوق أكسيد الهيدوجين لتحريك الأكسدة التي بسببها موت الخلايا المبرمج. وتقييم ما إذا كان فحص المنتج كان قادرا على حماية سلامة الخلايا تحت الاكسدة. تم إجراء الاختبارات حيث تم تنفيذ رباعي النسخ (التكرار الراباعي) في جميع عناصر التحكم وأجريت لكل سلسلة تخفيف من فحص الناتج مرتين.

مزيد من خلايا متعددة الأشكال النووية PMN هي على مسار الموت المبرمج أكثر من خلايا PBMC. أيضا، يتم تشغيلها بسهولة خلايا متعددة الأشكال النووية PMN بواسطة الاكسدة لإنتاج خلايا الأكسجين التفاعلية ROS وبالتالي تصعيد ظروف ضاغطة. قد يكون هذا أحد الأسباب أن زراعة خلايا متعددة الأشكال النووية PMN أظهرت بوضوح تجاوب Zrii أكبرمن الخلايا PBMC. وشوهدت اتجاهات مماثلة في كلا مجموعات الزراعة، ولكن تم الحصول على الدلالة إحصائية فقط للخلايا PMN. الرسوم البيانية أدناه تظهر البيانات من الخلايا متعددة الأشكال النووية PMN.

Zrii Protects Immune System

Zrii Protects Immune System

Zrii protects Immune system

Zrii Protects Immune System

3. تقييم الآثار المترتية على المراقبة المناعية، المضادة للبكتيريا والسلوك المضاد للإلتهابات لخلية متعددة الأشكال النووية PMN

الخلية متعددة الأشكال النووية من النوع النشط للغاية والمهاجر. وينقسم السلوك المهاجرة من هذا نوع من الخلايا إلى ما لا يقل عن نوعين: أ. الهجرة العشوائية وب الهجرة الموجهة. الهجرة العشوائية هي جزء من مراقبة المناعة الطبيعية، في حين أن الهجرة الموجهة تحدث نحو الجاذبية الكيميائية المحددة.

أقمنا فحص للهجرة حيث كلا النوعين من الهجرة يتم فحصه بشكل متوازي، وعلاوة على ذلك يتم فحص الهجرة الموجهه نحو 3 مركبات كيميائية تختلف فيما بينهم إختلافا واضحا:

i. ببتيدات البكتيريا f-Met-Leu-Phe

ii. التهابات السيتوكين الإنترلوكين – 8 (إي ل-8)

iii. التهابات الوسيط ليكوتريين ب 4 (ل ت ب 4)

سابقا، لقد تم العثور على أدلة مثيرة للاهتمام خلال تقييم لعدة مواد طبيعية أن بعض المنتجات قد توجه على وجه التحديد للحد من هجرة الخلايا متعددة الأشكال النووية PMN نحو وسطاء التهابات IL-8 و / أو LTB4 في الوقت الذي تسمح هجرة الخلايا متعددة الأشكال النووية PMN نحو ببتيدات البكتيريا كجزء طبيعي كمضاد للبكتيريا والمناعة. كنا نتمنى أن نرى تأثير مماثل مع Zrii.

حديثا تم تنقية وضع الخلايا متعددة الأشكال النووية PMN إلى حد يصل زراعة في غرفة الهجرة المزدوجة ، حيث النسيج الإيمائي اسفل الغرفة، وأعلى الغرفة إيماء لمجرى الدم.

الخلايا تُتطلى في أعلى الغرفة مع وبدون سلسلة التخفيفات من نتائج الفحص، وعدد مختلف من المركبات الكيميائية الجاذبة كانت موجودة في أسفل الغرفة. منابع التحكم شملت خلايا لم تتعرض لفحص المنتج ودون وجود مواد كيميائية جاذبة في أسفل المنبع، وسمح لتقييم خط الأساس للهجرة العشوائية.

تم إجراء الفحص ثلاث مرات بإستخدام خلايا معزولة حديثا من مختلف متطوعين في صحة جيدة. في كل اختبار، وأجريت في ضوابط النسخ الرباعي، والفحوصات المطابقة.

الرسوم الأربع البيانية أدناه توضح الزيادة في سلوك المهاجرة تحت الشروط الأربع المختلفة للفحص:

Zrii Amalaki Immune

Zrii Amalaki Immune

في هذه الرسوم البيانية، القيمة "1.00" هي خط الأساس، أي أن مستوى النشاط المهاجرة بدون معاملة الزد ري من الخلايا. القيم أعلى من 1.00 تشير أن إدراج الزد ري أدى إلى زيادة في السلوك المهاجرة. قيم أقل من1.00 يشير إلى أن الزد ري خفض الهجرة.

معاملات الزد ري للخلايا متعددة الأشكال النووية PMN نتج عن في زيادة الجرعة التي تعتمد في الهجرة العشوائية والموجه f-MLP. وهكذا، وأظهرت البيانات أن الزد ري دعم جانبين من جوانب السلوك الخلية متعددة الأشكال انووية PMN في المختبر، ويرتبط مع الدفاع عن المناعة الصحية في الجسم الحي.

كما يتبين من الرسوم البيانية على الصفحة التالية، الزد ري لم يكن له تأثير واضح على IL-8 للهجرة موجهة. في المقابل، كان الزد ري، قوي وبشكل واضح مضادة للالتهابات المؤثرة على LTB4 الهجرة الموجهة.

Zrii Amalaki Immune System

Immune System Zrii Amalaki

هذا الاتجاه الى تأثير مضاد للالتهابات، أوضح أنه أقل جرعة من الزد ري، أدت إلى اختبارات عبر مجموعة واسعة جدا من جرعات الزد ري. البيانات من هذه التجربة تظخر في منفصلة الرسم البياني أدناه. خط متقطع يظهر مستوى خط الأساس للهجرة PMN عندما لم يتم إضافة أي منتج للفحص.

Natural Immune system

الخلاصة

• زودت الزد ري تأثير وقائي في فحوصات كل من موت الخلايا المبرمج و وظيفة الميتوكوندريا عندما استخدمت خلايا متعددة الأشكال النووية PMN. وأظهرت PBMC اتجاها مماثلا، ولكن أقل ضوحا من ذلك بكثير.

 

• دعم الزد ري جانبين مهمين من وظيفة المناعة PMN، وهي الهجرة العشوائية والهجرة نحو البكتيريا الببتيدية F-MLP.

 

• الزد ري منعت بقوة هجرة الخلايا متعددة الأشكال النووية PMN نحو LTB4 وسيط للالتهابات.

 

وبالتالي، يدعم الزد ري قابلية نجاح الخلية وتشكيل الطاقة، فضلا عن الجوانب الرئيسية للاستجابة الفطرية (فورية) المناعية كمضادة للبكتيريا. ومع ذلك، فإن القدرة كمضاد للأكسدة وخصائص مضادة للالتهاب من الزد ري تشير إلى أن الزد ري قد يعزز آليات الدفاع المناعي في الوقت الذي تحمي خلايا الجسم نفسها من نواتج الإجهاد التأكسدي.

 

بحوث مستقبلية:

 

تأثيرات الزد ري المضادة للالتهاب واعدة جدا. الجرعة المنخفضة المطلوبة لكبح الهجرة للخلايا متعددة الأشكال النووية PMN لم يتم استكشافها حتى الآن، وإن كان ظهور تأثير قوي للزراعة عند تناول جرعة مقدارها 10 فيمتولتر/ لتر ، فنحن لم نتمكن بعد من تحديد أقل جرعة فعالة.

 

النتائج:

 

الإستساغة:

 

نتائج الإستساغة معطاه في الجدول 3. المنتج تم قبوله بشكل جيد وإستشاغة شراب الأملة المكمل الغذائي كانت معبرة أكثر من الجلوكوز (72±7 vs. 46±8 mm)(p<0.02).

 

مؤشر نسبة السكر بالدم:

 

قيم مؤشر نسبة السكر بالدم مجدولة في الجدول 3. قيم مؤشر نسبة السكر بالدم لشراب الأملة المكمل الغذائي كانت معبرة أقل من قيم مؤشر نسبة السكر بالدم للجلوكوز (100) . بإستخدام تصنيف براند ميللر شراب الأملة المكمل الغذائي مصنف كغذاء منخفض مؤشر نسبة السُكر بالدم.

 

جدول 3: الإستساغة، مؤشر نسبة السكر بالدم، وأصناف مؤشر نسبة السكر بالدم

Zrii Amalaki Research


* الأصناف من معامل مؤشر نسبة السكر بالدم (براند-ميللر) ** مختلفة إحصائيا عن الجلوكوز (P<0.05).

إستجابة سكر الدم:

 

تظهر إستجابة السكر في الدم على صفحات المسمى جيل 9002 مع الرسوم البيانية التي تبين المقارنة بين قيم السكر في الدم الكلي والمتزايدة استجابة للغذاء ومتوسط لثلاث اختبارات لضوابط الجلوكوز مع أهمية تحديدها مع t-test.

 

متوسط السكر في الدم للصائم كانت متطابقة قبل كل وجبة اختبار داخل كل مجموعة. لا يتم وصف ردود السكر في الدم بالتفصيل هنا ولكن يمكن الاطلاع على صفحات التحليل.

 

تجارب الجلوكوز المتكررة

 

لم يكن هناك أي تأثير كبير على قيم النظام IAUC بعد وجبات الجلوكوز المتكررة. متوسط من خلال الموضوع داخل معامل الاختلاف (CV) للقيم IAUC بعد الثلاث تجارب المتكررة للجلوكوز 20.2 ± 4.1٪.

 

الفحوصات أظهرت إرضاءا من الناحية التقنية بحكمها من خلال الموضوع أن تباين إستجابة متوسط نسبة السكر في الدم لإختبارات الجلوكوز المتكررة.